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微型人胰岛素基因载体的构建及其在花生中的表达

仵陶; 安胜军; 邵铁梅; 朱正歌; 焦展; 刘培; 李雪 河北化工医药职业技术学院/河北省高校生物反应器与蛋白类药物应用技术研发中心; 河北石家庄050026; 河北中医学院科研中心; 河北石家庄050091; 河北师范大学生命科学学院; 河北石家庄050024
分子医药农业   转基因花生   微型人胰岛素   载体构建   基因表达  

摘要:制备和培养含微型人胰岛素基因的转基因花生植株,从而利用转基因花生表达微型人胰岛素。首先按照植物偏爱密码子设计合成了修饰C肽的微型人胰岛素基因(mini insulin,MI),其中胰岛素B链通过丙-丙-赖三肽和A链相连接,在表达载体pBI121上构建了由花椰菜花叶病毒CAMV35S启动子驱动表达微型人胰岛素的重组质粒RIG。质粒RIG经农杆菌介导法转化至花生胚和去胚子叶中,抗生素筛选得到转基因花生苗,之后利用PCR和Western-blot对转基因花生幼叶进行分子生物学鉴定。结果显示,试验优化了农杆菌介导的花生转基因技术,并且得到了转基因花生苗;分子生物学技术鉴定结果显示,微型人胰岛素基因成功转入花生叶片基因组中,且在花生叶片中表达,其中以花生胚为外植体长出的再生苗的阳性检测率为2.27%。目前正在探索微型人胰岛素基因在花生油体中高效表达的方法,为转基因花生规模化生产微型人胰岛素提供理论基础。

简介:《江苏农业科学》(CN:32-1214/S)是一本有较高学术价值的大型半月刊,自创刊以来,选题新奇而不失报道广度,服务大众而不失理论高度。颇受业界和广大读者的关注和好评。

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