摘要：为建立适合绿绒蒿属( Meconopsis Vig.)的SSR反应体系,以多刺绿绒蒿( M. horridula )为试材,应用L 25 (5 6)进行正交试验,对影响SSR-PCR的主要因素进行优化。结果发现,Mg^2+对PCR反应效果影响最大,而dNTPs的影响最小。5个因素水平的变化对绿绒蒿属SSR-PCR反应体系的影响从大到小依次为Mg^2+> Taq 酶含量>引物浓度>DNA模板量>dNTPs浓度。适宜绿绒蒿属的SSR反应体系:总体积25 μL,Mg^2+浓度2 mmol/L,dNTPs浓度 0.2 mmol/L ,引物浓度 0.5 μmol/L,DNA模板量60 ng, Taq 聚合酶量 1.6 U,其余用ddH 2O补充。扩增程序为 94 ℃ 1.5 min;94 ℃ 20 s,最适退火温度20 s,72 ℃ 1 min,共35个循环;72 ℃ 5 min;4 ℃保存。利用优化后的反应体系对同属另外8种绿绒蒿( M. wallichi、M. racemosa、M. lingholm、M. prattii、M. rudis、M. napaulensis Pinky、 M. paniculata、M. superba )进行PCR扩增,均获得优良的扩增产物。因此,该试验建立的反应体系适用于绿绒蒿属植物的 SSR-PCR 反应。

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