摘要:本实验以猪GV期卵母细胞为模型,旨在研究乙二醇(EG)联合丙二醇(PROH)作为渗透性冷冻保护剂的冷冻保存方案。将卵母细胞在室温(25qC)和生理温度(39qC)2种冷冻操作条件下,采用2.5%EG+2.5%PROH直接处理10min(预平衡方式Ⅰ)或分步以3.75%EG+3.75%PROH、7.5%EG+7.5%PROH2种溶液各处理2.5min(预平衡方式Ⅱ)进行预平衡,然后Cryotop法玻璃化冷冻保存,解冻后分析其存活、体外成熟及孤雌发育能力。结果表明:在2种温度下,预平衡方式I组卵母细胞解冻后2h的存活率均显著高于预平衡方式Ⅱ组(P〈0.05),但存活卵母细胞成熟培养后,在各冷冻组间的存活率无明显差异(P〉0.05);冷冻组卵母细胞的核成熟也与新鲜卵母细胞无显著性差异(P〉0.05);在相同温度下,预平衡方式I组的卵裂率和囊胚发育率均显著高于预平衡方式Ⅱ组(P〈0.05);当采用同一预平衡方式时,39℃的冷冻操作条件所获卵裂率和囊胚发育率显著低于25qC(P〈0.05);此外,各组间囊胚细胞数均无明显差异(P〉0.05)。综上所述,EG联合PROH用于猪GV期卵母细胞的Cryotop法玻璃化冷冻保存时,25-C冷冻操作条件下,采用预平衡方式I可获得较高的冷冻存活率及囊胚发育率。
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