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对香豆酸组合物对白血病细胞的增殖抑制作用及机制

陈智; 王博; 裘玫; 林圣云; 熊昊 华中科技大学同济医学院附属武汉儿童医院小儿血液肿瘤科; 武汉430016; 浙江中医药大学附属第一医院血液科; 杭州310006; 湖北中医药大学中医临床学院伤寒教研室; 武汉430061
急性髓系白血病   对香豆酸组合物   细胞凋亡   细胞周期  

摘要:目的研究对香豆酸组合物(total coumarins of Hedyotis diffusa,TCHD)对急性髓系白血病(AML)细胞的增殖抑制作用及其机制。方法采用乙醇回流法提取TCHD,超高效液相色谱串联质谱系统(UPLC—MS/MS)检测其纯度。用不同浓度的TCHO(0.02、0.04、0.06、0.08、0.10mg·mL-1),作用于对数生长期的Kasumi-1细胞、KG-1细胞、THP-1细胞、U937细胞和K562细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTI")法检测各细胞增殖;作用于Kasumi-1细胞24h后,采用AnnexinV/PI流式细胞术检测细胞凋亡情况;运用流式细胞术检测药物作用后Kasumi-1细胞周期阻滞情况;Westernblot法检测PARP、easpase-3、caspase-9、caspase-8蛋白活性的变化;以及CDK4/6、cyelinD1、CDK2、p-CDK2、cyclinE、p21等细胞周期相关蛋白的变化。结果TCHD在-定浓度范围内对AML细胞增殖有明显的抑制作用,对Kasumi-1、KG-1、THP-1、U937和K562细胞的IC50(24hVS48h)分别为0.077vs0.059(mg·mL-1)、0.083VS0。067(mg·mL-1)、0.096VS0.072(mg·mL-1)、0.087V80.064(mg·mL-1)、O.096vs0.068(mg·mL-1),对Kasumi—l的抑制作用表现最明显,并且呈时间-浓度依赖性(r=0.357,P〈0.05)。不同浓度(O,O.02,O.04,0.06,0.08,0.10mg·mL-1)的TCHD作用于Kasumi-1细胞株24h后,凋亡率分别是(5.33±0.41)%、(7.99±0.45)%、(10.22±0.32)%、(20.104-1.99)%、(28.66±0.67)%和(33.24±2.12)%。0.02~0.06mg·mL-1的TCHD处理Kasumi.1细胞24h后用流式细胞术检测到该细胞Gn/G.期的比例依次为(51.43±3.21)%、(62.91±2.35)%和(76.42±4.14)%,与空白对照组[(35.8±5.25)%]比较,差异均有统计学意义(P值均〈0.05)。Westernblot结果显示,不同浓度的TCHD能浓度依耐性激活easpase.8(P〈0.01)、caspase-9、caspase-3和PARP(其余P〈0.05),促进

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