摘要：目的研究自噬基因Beclin1沉默后增强伊马替尼耐药的人髓性白血病细胞K562/IMA的药物敏感性的作用。方法采用首剂大剂量冲击和逐步增加剂量相结合的方法构建伊马替尼耐药的人髓性白血病耐药细胞K562/IMA,伊马替尼干预K562和K562/IMA细胞株后,采用CCK-8检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率确定药物耐药水平,Western-blot检测耐药株中Beclin1的表达。采用小干扰RNA技术(siRNA)转染Beclin1的siRNA-Beclin1沉默K562/IMA的Beclin1基因。设置对照组(control)、siRNA阴性对照组(siRNA-NC)和Beclin1 siRNA组(siRNA-Beclin1)。采用RT-QPCR和Western-blot法鉴定沉默后各组细胞Beclin1蛋白和mRNA的表达水平。CCK-8法检测各组细胞对于伊马替尼的敏感性,并计算半数抑制浓度IC50。流式细胞术检测各组细胞的凋亡率。Western-blot法检测Beclin1、Bcl-2、Bax、cleaved-caspase 3、caspase-3、细胞色素C(cyto-C)的表达水平,Transwell小室检测细胞转移侵袭能力。结果 K562/IMA细胞株对10μmol·L-1的伊马替尼耐药,且细胞中Beclin1的表达水平高于K562细胞株,在梯度浓度范围中K562/IMA的细胞活力显著高于K562,而细胞凋亡率低于K562细胞。siRNA沉默Beclin1后,siRNA-Beclin1组细胞活力相比control组显著降低,细胞凋亡率显著增高,而半数抑制浓度IC50值显著低于control组。细胞中凋亡相关蛋白Bax、cleaved-caspase 3、caspase-3、cyto-C的水平显著高于control组,Bcl-2水平低于control组,侵袭试验结果显示,Beclin1沉默后细胞侵袭能力显著减弱,相比control组具有统计学意义。结论 Beclin1在人髓性白血病对于伊马替尼耐药中具有重要作用,自噬可能参与了耐药过程。沉默Beclin1后可以降低细胞耐药水平,提高药物敏感性。

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