摘要：目的建立检测类风湿关节炎患者红细胞中多聚谷氨酸化甲氨蝶呤(methotrexate polyglutamates,MTXPGs)浓度的HPLC-MS/MS法。方法采用间接测定法,以同位素甲氨蝶呤-d3为内标,分别测定游离甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)和总MTX(MTX+MTXPGs),从而计算出红细胞中MTXPGs浓度。为测定游离MTX,全血样品经反复冻融、甲醇沉淀蛋白后,经LC-MS/MS进样分析,采用电喷雾离子源(ESI)正离子模式,多反应监测(MRM)。为测定总MTX,样品(反复冻融后)与200mmol·L^-1抗坏血酸37℃孵育2.5 h,酶促MTXPGs转化为MTX,蛋白沉淀后进样分析。结果全血MTX质量浓度在1~300ng·mL^-1内线性关系良好(r=0.9994),检测限(LOD)为0.5 ng·mL^-1,准确度(RE)在±5%内,日内和日间精密度(RSD)分别低于7.96%和10.88%。结论本方法快速、灵敏,具有高专属性和重现性,成功应用于临床上类风湿关节炎患者红细胞中MTXPGs浓度的监测。

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