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柱前衍生-液质联用法测定过氧化物还原酶2模拟肽中Asp外消旋化研究

高准; 英语佳; 张欣然; 谢文敏; 李博 中国药科大学药学院; 南京210009; 药物质量与安全预警教育部重点实验室; 蛋白质化学与结构生物学重点实验室; 南京210009; 南京绿叶制药有限公司; 南京210061
柱前衍生   液质联用   外消旋化   天冬氨酸  

摘要:目的建立了一种柱前衍生-液质联用测定过氧化物还原酶2(Prx2)模拟肽中天冬氨酸(Asp)外消旋化的方法,测定不同p H条件下,天冬氨酸外消旋化速率常数。方法采用6.0 mol·L-1盐酸水解八肽,水解液减压干燥至干,加水溶解,以L-2-氨基丁酸为内标物,GITC为柱前衍生试剂,在p H 11.0碳酸氢钠溶液中衍生化。色谱条件:分离柱为YMC-PACK ODS-AQ(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相为5%冰醋酸溶液(A)和乙腈-甲醇(90∶10)(B),梯度洗脱(0~22 min,20%~27.5%B;22~22.01 min,27.5%~95%B;22.01~27 min,95%B;27~27.01 min,95%~20%B;27.01~30 min,20%B),流速为1 mL·min-1;质谱条件:采用电喷雾离子源及正离子单离子监测模式(SIM)定量,天冬氨酸GITC衍生化物m/z 523,内标GITC衍生化物m/z 493。结果 D/L-Asp质量浓度在1.010~200.2μg·m L-1时,其峰面积与内标物峰面积的比值和氨基酸的质量浓度之间的线性关系良好(r> 0.999),最低定量限(LLOQ)为1.010μg·m L-1;LLOQ、低、中和高浓度(LQC、MQC和HQC)日内和日间精密度RSD分别为0.98%~9.7%、3.3%~10.9%,加样回收率为100.2%~108.1%。在p H 3.0~10.0,天冬氨酸外消旋化的速率常数为0~6.24×10-4·d-1。结论该方法准确、快速,可用于Prx2中D/L-Asp检测。

简介:《中南药学》(CN:43-1408/R)是一本有较高学术价值的大型月刊,自创刊以来,选题新奇而不失报道广度,服务大众而不失理论高度。颇受业界和广大读者的关注和好评。

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