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细胞自噬在酒精性股骨头坏死中的作用及相关机制研究

陶振宇; 张月雷; 陈华; 孙辽军 温州医科大学附属第二医院; 浙江温州325027
股骨头坏死   自噬   西罗莫司   小鼠   动物实验  

摘要:目的:探讨细胞自噬在酒精性股骨头坏死中的作用及相关机制。方法:将15只1月龄SPF级C57小鼠随机分为空白对照组、酒精组及雷帕霉素-酒精组,每组5只。空白对照组喂食饮用水6周,腹腔内注射5 mg·kg-1不含雷帕霉素的溶剂;酒精组喂食含30%酒精的饮用水6周,腹腔内注射5 mg·kg-1不含雷帕霉素的溶剂;雷帕霉素-酒精组喂食含30%酒精的饮用水6周,腹腔内注射5 mg·kg-1的雷帕霉素溶液。腹腔内注射每天1次,连续注射2周。酒精干预6周后,获取各组小鼠右侧股骨头,行微型CT平扫后将股骨头制成切片,苏木素-伊红染色后在显微镜下观察股骨头组织形态,并计算空骨陷窝百分比(总细胞凋亡率)。取MC3T3-E1细胞,传代培养至第3代,经含酒精浓度为0 mmol·L-1、25 mmol·L-1、50 mmol·L-1、100 mmol·L-1、200 mmol·L-1的α-MEM培养基孵育后,采用CCK8法检测其相对生长率。将培养好的第3代MC3T3-E1细胞随机分为4组,分别以普通α-MEM培养基(正常组)、含100 mmol·L-1酒精的α-MEM培养基(含酒精组)、含100 nmol·L-1雷帕霉素的α-MEM培养基(含雷帕霉素组)、含100 mmol·L-1酒精和100 nmol·L-1雷帕霉素的α-MEM培养基(含酒精-雷帕霉素组)培养,连续培养24 h;采用Western blot法检测MC3T3-E1细胞中微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)-Ⅰ、LC3-Ⅱ、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)、Beclin1蛋白表达量。结果:①股骨头CT扫描结果。空白对照组小鼠股骨头骨小梁大体形态良好,分布均匀,未见软骨下坏死带形成;酒精组小鼠股骨头软骨下坏死带形成,骨小梁闭塞,髓腔内骨小梁变细、稀疏、断裂,骨皮质增厚;雷帕霉素-酒精组小鼠股骨头CT影像学表现介于酒精组与空白对照组之间,可见髓腔内部分骨小梁出现断裂萎缩,软骨下骨部分坏死形成。②显微镜下股骨头组织形态观察结果。空白对照组小鼠股�

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