欢迎访问发表云网!为您提供杂志订阅、期刊投稿咨询服务!

重组CKB真核表达载体的构建及其稳定转染NCI—H520细胞系的建立

曾谷清 许艳 易红 李萃 李茂玉 汤参娥 肖志强 中南大学湘雅医院卫生部肿瘤蛋白质组学重点实验室 长沙410008 南华大学医学院外总教研室
肌酸激酶   遗传载体   转染   肿瘤  

摘要:目的构建pEGFP—N1-CKB真核表达载体并将其稳定转染到肺鳞癌细胞NCI—H520中,建立稳定转染的NCI—H520细胞系,为后续研究奠定基础。方法以人CKBcDNA文库为模板,用PCR扩增人CKBcDNA的编码区,并将扩增的cDN段与载体连接后亚克隆到真核表达载体pEGFP-N1中。重组子经酶切分析及测序鉴定后,用脂质体转染技术将其导入到人肺鳞癌细胞系NCI—H520,经G418筛选并建立稳定的转染细胞株,应用Westernblot检测转染前后该细胞株CKB基因的表达。结果pEGFP—N1-CKB经酶切鉴定及DNA测序证实序列完全正确,真核表达载体构建成功;经Westernblot检测,重组质粒转染株中CKB基因的表达水平明显高于对照组,证实CKB基因已稳定转染到NCI-H520细胞中并得到表达。结论成功构建了pEGFP—N1-CKB真核表达质粒,建立了稳定表达CKB的NCI-H520细胞系,为进一步研究CKB的生物学功能奠定了基础。

简介:《中国医师》(CN:43-1274/R)是一本有较高学术价值的大型月刊,自创刊以来,选题新奇而不失报道广度,服务大众而不失理论高度。颇受业界和广大读者的关注和好评。

注:因版权方要求,不能公开全文,如需全文,请咨询杂志社

中国医师

统计源期刊 下单

关注 30人评论|5人关注
服务与支持